熒光染料的優點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途! 產品名稱 | 潰瘍分枝桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mycobacterium ulcerans | 貨號 | YSP96962 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比,因此,根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態性以及根據SNP區別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 Rhesus antibody Rh phospho-Src(Tyr529) 酸化Src原癌基因抗體 規格 0.1ml Goat Anti-Chicken IgG 羊抗雞IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規格: 1mg OPG(Osteoprotegerin) 護骨素(多肽抗原)Multi-class antibodies規格: 0.5mg Anti-CD5L/Api6 CD5L抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml Rhesus antibody Rh p400 p400蛋白抗體 規格 0.2ml FCGR2A Kit Cynomolgus 食蟹猴 CD32a / Fc gamma RIIA / FCGR2A ELISA配對抗體 ELISA TM9SF4 英文名稱: 跨膜蛋白9家族成員4抗體 0.2ml C11ORF46 英文名稱: 11號染色體開放閱讀框46抗體 0.2ml Anti-Phospho-IRF7 (Ser471/472) 酸化干擾素調節因子7抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml DDC(Human dopamine decarboxylase) ELISA Kit 人多巴胺脫羧酶Multi-class antibodies規格: 48T Anti-Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870) 細胞核因子/k基因結合核因子p100抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh IL-19/NG.1 白細胞介素-19抗體 規格 0.2ml Col II (Mouse Collagen Type II ) ELISA Kit 小鼠Ⅱ型膠原 96T Phospho-PDPK1(Ser410) 英文名稱: 酸化3酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體 0.1ml Wiskott-Aldrich綜合癥蛋白 多克隆抗體WASL Polyclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 酸肌醇結合蛋白1 多克隆抗體WDFY1 Polyclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul WD重復域44 多克隆抗體WDR44 Polyclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul WAP四二硫化物核心域蛋白1 多克隆抗體WFDC1 Polyclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul Wolfram綜合征蛋白1 多克隆抗體WFS1 Polyclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul WNT1可誘導信號轉導途徑蛋白1 多克隆抗體WISP1 Polyclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 潰瘍分枝桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化β 連環素蛋白抗體SATB1/FITC 熒光素標記核基質結合區結合蛋白1抗體IgG100 ul 原癌蛋白CBL2抗體Phospho-SATB1 (Ser47)/FITC 熒光素標記酸化核基質結合區結合蛋白1抗體IgG100 ul 信號調節蛋白α抗體SCF/FITC 熒光素標記干細胞生長因子抗體IgG10 ug 信號淋巴細胞活化分子CD150抗體SCG3/SgIII /FITC 熒光素標記分泌粒蛋白Ⅲ抗體IgG10 ug 巨噬細胞炎性蛋白16抗體SCN1A/FITC 熒光素標記電壓閥門鈉通道蛋白a1/癲癇相關蛋白抗體IgG100 ul 果蠅CG6856-PA抗體SCN2A/FITC 熒光素標記電壓閥門鈉通道蛋白a2/癲癇相關蛋白抗體IgG100 ul 細胞色素c氧化酶COX7A2抗體SCN9A/NAV1.7/FITC 熒光素標記電壓開啟的鈉離子通道SCN9AIgG100 ul 剪切和多聚腺苷酸化特異性因子4抗體SCP2/NLTP/FITC 熒光素標記固醇攜帶蛋白2抗體IgG100 ul 組織蛋白酶E抗體SCP3/FITC 熒光素標記聯會復合體蛋白3抗體IgG100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 |