樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 腦膜炎黃桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Flavobacterium meningosepticum | 貨號 | YSP96719 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 5,5-二硫雙(2-甲酸)FAM129B AntibodyN-芐基異 DIPSO.Na;[N-N-雙(2-羥乙基)氨基]-2-羥基磺酸單鈉鹽Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-羥甲基嗎啉 DIPSO; [N-N-雙(2-羥乙基)氨基]-2-羥基磺酸 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjuga)氨基胍硝酸鹽 順式2,6-二甲基嗎啉β-Actin (13E5) Rabbit mAb (HRP Conjuga)三基氯化膦 雙十八烷基二甲基溴化銨Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjuga)果糖-1,6-二酸一鈣鹽 2,二巰基磺酸鈉TCTP (D10F2) Rabbit mAb酸甲酯 CHPS-Na;氯-2-羥基磺酸鈉TCTP (D10F2) Rabbit mAb5-乙酰基嘧啶 CHES; 2-環己基乙磺酸PD-L1 (E1L3N) XP Rabbit mAb肉桂酸甲酯 CAPSO. Na;(環己)-2-羥基-1-磺酸鈉鹽SimpleChIP® Mouse CIS Intron 1 PrimersD-2-羥基酸 CAPSO .Na;(環己)-2-羥基-1-磺酸鈉鹽PhosphoPlus® LKB1 (Ser428) Antibody Duet2-氟-5-溴甲 CAPSO;(環己)-2-羥基-1-磺酸 GAPDH (D4C6R) Mouse mAb (HRP Conjuga)1,2-二乙烷 SBES;2-溴乙基磺酸鈉Rab9 (D22A6) Rabbit mAb一水高酸鈉 BICINE;N,N-二羥乙基甘氨酸RPL5 (D5Q5X) Rabbit mAb過酸鈉 BES sodium salt; N,N-二(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸鈉RCC1 (D15H6) Rabbit mAb肉桂酸乙酯 BES free acid; N,N-(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸4E-BP1 Control Cell Extracts4'-溴酮 黃芪多糖(68%)β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)硝酸鉍 黃芪多糖(50%)TIAR Antibody硝酸釤 黃芪多糖(30%)SimpleChIP® Human ID1 Promor Primersbeta-溴乙 腦膜炎黃桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒載脂蛋白B抗體Caspase-12(hunman)/FITC 熒光素標記半胱酸蛋白酶蛋白-12抗體()IgG100 ul 花生四酸15脂氧合酶2抗體Caspase-12/FITC 熒光素標記半胱酸蛋白酶蛋白-12抗體IgG100 ul 載脂蛋白C4抗體Caspase-13/FITC 熒光素標記半胱酸蛋白酶蛋白-13抗體IgG100 ul 低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體Phospho-Caspase-9 (Thr125) /FITC 熒光素標記兔抗、大、白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgG100 ul 原始廣泛存在蛋白1抗體 Alpha-Canin/ Alpha-cats /FITC 熒光素標記α-連環蛋白抗體(α-α鏈接素)IgG20 ul 錨蛋白重復結構域蛋白37抗體 Beta-canin/ Beta-cats /FITC 熒光素標記 β-連環蛋白抗體IgG100 ul α1,4-半糖基轉移酶1Phospho- Beta-Canin (Ser33/37) /FITC 熒光素標記兔抗、大、β 連環素蛋白抗體IgG100 ul 血管緊張素Ⅱ受體相關蛋白抗體p- Beta canin/FITC 熒光素標記酸化β-連環蛋白抗體IgG100 ul 膜粘連蛋白2受體抗體Phospho- Beta-Canin (Ser45)/FITC 熒光素標記兔抗、大、β 連環素蛋白抗體IgG100 ul |