熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 弗朗西斯菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Francisella spp. | 貨號 | YSP96733 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
洋薊素;1,5-二咖啡酰奎寧酸(標準品)Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)甲氧基-2-硝基酚 二氫丹參酮I（標準品）NME1/NDKA (D14H1) Rabbit mAb布洛芬 二氫歐山芹當歸酸酯（標準品）EGF Receptor (L858R Mutant Specific) (43B2) Rabbit mAb (Biotinylad)環己硫 二氫楊梅素PathScan® Total MUC1 Sandwich ELISA KitBOC-L-脯氨酸 二氫楊梅素(標準品)SimpleChIP® Mouse Ccdc57 Intron 5 Primers2,二甲 番瀉苷A（標準品）Phospho-NMDA Receptor 2B (GluN2B) (Ser1284) Antibody5-己酸 番瀉苷B（標準品）HDAC1 (10E2) Mouse mAb1H-并咪唑-5-羧酸 防己諾林（標準品）HDAC1 (10E2) Mouse mAb2,4,5-三氟芐基溴 粉防己;漢防己甲素(標準品)SHOC2 (D7N1A) Rabbit mAb甲基-吡唑 佛手柑內酯Histone H2A.X (D17A3) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)三氟甲基煙酸 甘草次酸(α型),18alpha-甘草次酸(標準品)SirT7 (D3K5A) Rabbit mAb四甲 甘草苷（標準品）JARID1C (D29B9) Rabbit mAb2,二氟甲酸 甘草素(左旋)（標準品）JARID1C (D29B9) Rabbit mAb2,二氟甲酸 甘草酸Dicer (D38E7) Rabbit mAb氟乙 甘草酸(標準品)Dicer (D38E7) Rabbit mAb2-氯-溴甲 甘草酸單銨鹽(標準品)MLL3 (D1S1V) Rabbit mAb對溴乙基 甘草酸單銨鹽Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb溴甲 甘草酸二銨鹽（標準品）Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb吡啶
弗朗西斯菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化Ack1抗體CD44v4 /FITC 熒光素標記兔抗、大、CD44V4抗體IgG100 ul 酸化β抑制蛋白1抗體CD44v5 /FITC 熒光素標記兔抗、大、CD44V5抗體IgG100 ul 酸化有絲分裂激酶A抗體CD44V6/CD44/HCAM/FITC 熒光素標記抗CD44抗體IgG100 ul 酸化APS抗體CD44v7 /FITC 熒光素標記兔抗、大、CD44V7抗體IgG100 ul 有絲分裂激酶A抗體CD45(LCA)/FITC 熒光素標記CD45(白細胞共同抗原)抗體100 ul 干擾素誘導蛋白AIM2抗體CD45/RBITC 紅色熒光素羅丹明標記CD45抗體 IgG100 ul 水通道蛋白-2抗體CD45RO/FITC 熒光素標記CD45RO抗體IgG20 ul 腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結合蛋白抗體CD46/MCP /FITC 熒光素標記膜輔蛋白/內源性輔助因子活性蛋白抗體()IgG100 ul ADP核糖基化因子樣11抗體CD46/MCP /FITC 熒光素標記膜輔蛋白/內源性輔助因子活性蛋白抗體IgG100 ul |
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