熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 闊盤吸蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Eurytrema spp. | 貨號 | YSP96705 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
右旋延胡索乙素(標準品）HSP70 Antibody三溴化 對溴芐 HSP70 (6B3) Rat mAb氟化鈣 靈芝酸BHSP90 Antibody高酸鈉 延胡索乙素；消旋延胡索乙素(標準品)HSP90 (E289) Antibody 延胡索乙素；消旋延胡索乙素HSP70 (D69) Antibody高氯酸鋰 孕酮醋酸酯,孕諾龍乙酸酯HSP90 (C45G5) Rabbit mAb1,并二氧-甲 孕酮醋酸酯(標準品)HSP90 (C45G5) Rabbit mAb四乙基氫氧化銨 殼聚糖(M.W70w-100w)SimpleChIP® Human C/EBPδ Promor Primers水合肼 殼聚糖(M.W.10萬)Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (Alexa Fluor® 488 Conjuga)乙基三乙氧基硅烷 大蒜素，二基二硫Cas9 (7A9-3A3) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)原碳酸四乙酯 α-香附酮Mitochondrial Dynamics Antibody Sampler Kit硅酸四乙酯 頭孢克洛(標準品)Rab6 Antibody氨曲南 頭孢克洛PathScan® Phospho-YAP (Ser127) Sandwich ELISA Kit(3S)-3,嗎啉二羧酸 叔丁酯 頭孢拉定Phospho-DBC1 (Thr454) Antibody酸三乙酯 頭孢拉定(標準品)p53 (DO-7) Mouse mAbCBZ-ALPHA-ALLYL-L-GLY 倍他米松17-戊酸酯,戊酸倍他米松NF-κB2 p100/p52 Antibody2,5-二氯吡啶- 戊酸倍他米松(標準品)NF-κB2 p100/p52 Antibody二乙氧基二甲基硅烷 頭孢唑肟,頭孢唑肟酸TAZ (V386) Antibody鹽酸特比萘芬
闊盤吸蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒生物素檢測試劑盒p-BAD/FITC 熒光素標記抗酸化相關死亡促進因子p-BAD抗體IgG20 ul 三聚ELISA快速檢測試劑盒BAD(phospho Ser75,Ser99,Ser118) /FITC 熒光素標記酸化相關死亡促進因子抗體IgG100 ul 鳥類催素(PRL/LTH)ELISA試劑盒Phospho-Bad(Ser136) /FITC 熒光素標記兔抗、大、相關死亡促進因子抗體IgG100 ul 鳥H5N1 IgG抗體ELSIA 試劑盒Phospho-Bad(Ser155) /FITC 熒光素標記兔抗、大、相關死亡促進因子抗體IgG100 ul 獼猴骨特異性性酸酶B(ALP-B)ELISA試劑盒BADH2/FITC 熒光素標記BADH2抗體IgG20 ul 家蠶卵黃蛋白(LT)ELISA試劑盒BAFF/CD257/FITC 熒光素標記TNF家族B細胞激活因子抗體IgG100 ul 鯽魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA試劑盒BAFFR/Tnfrsf13c/CD268/FITC 熒光素標記B細胞活化因子受體抗體IgG100 ul 核黃素轉運因子3(RFT3)ELISA試劑盒Bak/FITC 熒光素標記Bcl-2同源拮抗劑Bak抗體IgG100 ul 核黃素轉運因子2(RFT2)ELISA試劑盒 Phospho-BAP1 (p-Ser592)(human) /FITC 熒光素標記兔抗酸化癌易感基因1抗體()IgG100 ul |
點擊放大