樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 西方蜜蜂微孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Nosema apis | 貨號 | YSP97015 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 甘露聚糖結合凝集素關聯絲氨酸蛋白酶2(MASP2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 溜曲霉 100g 精氨酸(Arg)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 黑曲霉 25g 末端補體復合體C5b-9(C5b-9)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 燕麥嗜酸菌西瓜亞種* 5g 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥99% 金黃硬皮馬勃 250mg 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥99% 金黃色葡萄球菌金黃亞種 50MG 簇集蛋白(CLU)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 100μg/ml,u=2% 乳酸乳球菌乳亞種 1ml 胰多肽(PP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 金黃色葡萄球菌金黃亞種 1g 穿孔素1(PRF1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 盤菌狀肉座菌 25g α1-抗胰蛋白酶(α1AT)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 大腸埃希氏菌 5g 干擾素γ誘導單核因子(MIγ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥98% 黃曲霉 100mg 干擾素誘導T-細胞α亞族趨化劑(ITαC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 長白山近藤氏酵母 1g 緊密連接蛋白1(TJP1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 噴泉鏈霉菌 5g 誘導型一氧化氮合酶(NOS2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% pGAPZαA 1g 層粘連蛋白(LN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 無花果曲霉 250mg Endoglin蛋白(ENG)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 長枝木霉 1g 雄激素受體(AR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 25g 阿黑皮素原(POMC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 毛栓孔菌 5g 谷胱甘肽還原酶(GR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 藍微褐鏈霉菌 1g 西方蜜蜂微孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒2號染色體開放閱讀框69抗體CD99/E2 antigen/FITC 熒光素標記CD99抗體IgG100 ul 3號染色體開放閱讀框18抗體XAF1/FITC 熒光素標記XIAP相關因子1凋亡抑制蛋白抗體IgG1 Kit 巨噬細胞炎癥因子1β /MIP-1β抗體XBP-1/FITC 熒光素標記細胞核轉錄因子X盒結合蛋白抗體IgG100 ul 細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子抗體MMP-2/RBITC 紅色羅丹明標記基質金屬蛋白酶-2抗體IgG20 ul 整合素αM/巨噬細胞表面分子抗體XIAP/FITC 熒光素標記X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗體IgG100 ul 血小板內皮細胞黏附分子-1抗體XRCC1/FITC 熒光素標記X射線修復交叉互補蛋白/細胞基切除修復基因抗體IgG100µl 血小板內皮細胞黏附分子1抗體YBX-1/FITC 熒光素標記高保留轉錄因子抗體IgG100 ul CD34抗體YY1/FITC 熒光素標記核轉錄因子YY1抗體IgG100 ul CD36抗體ZAP-70/FITC 熒光素標記zeta相關蛋白70抗體IgG20 ul |