客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 產品名稱 | 口腔支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mycoplasma orale | 貨號 | YSP96985 |
熒光定量PCR試劑盒技術: 產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 ASB12 英文名稱: 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族12抗體 0.2ml Anti-TSARG6/DNAJB13 生精細胞凋亡相關基因6抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml TLR4 ELISA Kit 大鼠Toll樣受體4Multi-class antibodies規格: 48T Anti-Tissue factor 組織因子抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Goat Anti-Bovine IgG 羊抗IgG 規格 1mg PCX(Human Podocalyxin) ELISA Kit 人足細胞標記蛋白/足盂蛋白 96T Nebulette 英文名稱: 肌動蛋白結合蛋白Z盤狀蛋白抗體 0.2ml C13orf38 英文名稱: 13號染色體開放閱讀框38抗體 0.2ml Anti-IL-33 白介素33抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml HIT(Human heparin associated antibody) ELISA Kit 人抗肝素PF4復合物抗體/HIT抗體Multi-class antibodies規格: 48T Anti-IL-2 白介素2抗體(人)Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh LRP1/CD91 低密度脂蛋白受體相關蛋白1抗體 規格 0.2ml LBP(Human lipolysaccharide binding protein) ELISA Kit 人脂多糖結合蛋白 96T phospho-c-Raf(Ser494) 英文名稱: 酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml DNA切除修復交叉互補基因1 單克隆抗體ERCC1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 人類表皮生長因子受體2 單克隆抗體HER2 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 細胞角蛋白6 單克隆抗體Cytokeratin 6 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul Proinsulin,PI ELISA Kit 大鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat insulin autoantibodies,IAA ELISA Kit 大鼠胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒 進口/原裝 英Methylated/Non-methylated DNA Standard4℃保存100次 人基質金屬蛋白酶基因PCR檢測試劑盒低溫運輸,-20℃保存50T 人基因組DNA混合液Human Genomic DNA Mix4℃保存100μg 異橙黃酮;3’,4’?,5,7,8-五甲氧基黃酮3’,4’ ,5,7,8-/原裝 英文名稱: Rat aldehyde dehydrogenase,ALDH ELISA Kit 大鼠乙酰膽堿(Ach)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat acetylcholine,ACH ELISA Kit 大鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit 大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Acetylcholinesterase,AChE ELISA Kit 大鼠抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Oncostatin-M,OSM ELISA Kit 大鼠抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Inhibin,INH-A ELISA Kit 大鼠抑制素?CK17 單克隆抗體CK17 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul CD23 單克隆抗體CD23 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 胰島素退化酶 單克隆抗體IDE Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 口腔支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒促腎上腺皮質釋放激素受體1抗體traspan5/FITC 熒光素標記四分子交聯體5抗體IgG100 ul 酸化絲切蛋白抗體Phospho-TBK1/NAK (Ser172) /FITC 熒光素標記NF-κB活化激酶抗體IgG20 ul 皮層肌動蛋白抗體T7 tag/FITC 熒光素標記T7 tag標簽抗體IgG100 ul 促腎上腺皮質釋放激素受體2抗體T7 tag/HRP 辣根過氧化物酶標記T7 tag標簽抗體IgG20 ul 酸化原癌基因c-kit抗體TFF3 /FITC 熒光素標記三葉肽因子3抗體IgG100µl 酸化原癌基因c-kit抗體TFF2/FITC 熒光素標記三葉肽因子2抗體IgG100 ul 胸腺基質淋巴細胞生成素受體抗體TFPI/LACI /FITC 熒光素標記組織因子途徑抑制劑抗體IgG100 ul 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體TFPI-2/FITC 熒光素標記組織因子途徑抑制劑-2抗體IgG100 ul 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體TFR/CD71/FITC 熒光素標記轉鐵蛋白受體抗體IgG100 ul 實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 |