熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
化銨(>99%,BR)IL-2Rα/CD25 (D6K5F) Rabbit mAb6-甲基煙酰

十二水合硫酸鐵銨(>98%,BR)LXR-β (D6M9D) Rabbit mAb5-尿苷

鉬酸銨四水Spartin AntibodyN-1-Boc-N-Cbz-2-哌甲酸

硫酸鎳銨六水(>98%,BR)Asymmetric Di-Methyl Arginine Motif [adme-R] MultiMab™ Rabbit mAb mix(S)-2-甲基吡咯烷

鉬酸銨(>96.5%,BR)Phospho-Rpb1 CTD (Ser5) (D9N5I) Rabbit mAb2-氨基-5-溴吡啶-羧酸

酸氫銨鈉(>98%,BR)Rad23B (D4W7F) Rabbit mAb5-氯噻唑-2-磺酰氯

丁二酸銨(>98%,BR)RIP3 (E1Z1D) Rabbit mAb芐

硫代硫酸銨IFITM2 Antibody2-氟-5-三氟甲酸

鹽酸氨啉(>99%,BP)Afadin (D1Y3Z) Rabbit mAb二甲氨基

[N-(1,1-二甲基-2-羥乙基)]氨基-2-羥烷磺酸鈉鹽(>98%,BP)TRIB2 (D8P2X) Rabbit mAb氨基異丁酸水合物

對(duì)甲氧基甲(>97%,BR)Acetyl-Histone H4 (Lys16) (E2B8W) Rabbit mAb對(duì)羥基肉桂酸乙酯（順?lè)椿旌衔铮?/span>

三氧(>98%,BR)Non-phospho (Active) β-Canin (Ser33/37/Thr41) (D13A1) Rabbit mAb (PE Conjuga)-1-

(>99%,BR)DAX1 (D2F1) Rabbit mAb叔丁氧羰酰基正纈氨酸

過(guò)硫酸銨PVR/CD155 (D3G7H) Rabbit mAb6-溴-2-萘甲酸

甲亞鹽(>95%，BR)Phospho-Rpb1 CTD (Ser2/Ser5) (D1G3K) Rabbit mAb2-溴-吡啶甲

天青C(>50%,BS)Griess Reagent Nitri Measurement Kit異丁酸橙花酯

氯酸鋇一水(>99%,BR)Prolactin Receptor (D4A9) Rabbit mAb甲氨蝶呤

硫酸鋇(>98%,BR)Mios (D12C6) Rabbit mAb1,5-二氟-2,二
牛皰疹病毒3型探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒谷氨酸[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)抗體ELISA試劑盒GP65/SDFR1/NPTN  間質(zhì)細(xì)胞衍化因子受體1抗體100 ul

谷氨酸[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)ELISA試劑盒GPA33  糖蛋白A33抗體100 ul

孤腓肽(OFQ/N)ELISA試劑盒GNLY/NKG5  顆粒溶素抗體100 ul

鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)ELISA試劑盒GPNMB/Osoactivin  GPNMB抗體100 ul

鉤端螺旋體IgG(Leptospira)ELISA試劑盒g(shù)lypican 1  脂酰基醇蛋白聚糖-1抗體100 ul

弓蛔蟲(chóng)(Tc)抗體(IgG)ELISA試劑盒g(shù)lypican 3/GPC3  脂酰基醇蛋白聚糖-3抗體20 ul

庚型肝炎病毒抗體(IgM)ELISA試劑盒Glypican 4  脂酰基醇蛋白聚糖-4抗體100 ul

庚型肝炎病毒(HGV)抗原ELISA試劑盒Glycodelin A/PP14  胎盤(pán)蛋白14抗體100 ul

庚型肝炎病毒(HGV)抗體(IgG)ELISA試劑盒Glucocorticoid receptor  糖皮質(zhì)激素受體抗體100 ul
PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。