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免疫組織化學技術染色注意事項

點擊次數:935 更新時間:2015-07-02
 

注意事項

(1)免疫熒光法zui適宜進行冰凍切片的染色,因為此種切片一般抗原保存得較好。若是石蠟切片則應首先選用免疫酶法等染色技術。

(2)使用商品的熒光標記抗體,在進行染色前應作抗體效價的測定,找出合適的稀釋度后再進行成批染色。一般而言,在陽性物質發出明亮熒光而背景又較暗時的稀釋度是較為合適的。高稀釋度的熒光抗體可以減少非特異性著色使染色結果更具特異性,但稀釋度過高會導致假陰性的出現。低稀釋度的熒光抗體使結果較易觀察,但會帶來非特異性的著色,甚至出現假陽性的結果。

(3)非特異熒光的消除。非特異性熒光的消除方法較多。一般而言,冰凍切片的非特異性熒光較強,石蠟切片的非特異性熒光較弱。常用的方法有①先用非免疫血清如10%牛血清等處理切片,然后再行熒光染色。②用小鼠相應組織的干粉吸收熒光抗體中的非特異性成分。③選擇合適的稀釋度和切片。④選用高特異性和價的熒光抗體。

(4)洗滌要*。每道程序都有用蒸餾水或緩沖液洗滌以清除殘留在切片中的 試劑,以達到特異著色的目的。洗滌時不論是沖洗還是振蕩洗滌,其基本原則是要達到洗滌干凈的目的,或者說充分稀釋上一道程序中的 試劑 ,使其含量降至zui低。一般只要有足夠的時間,以靜置廷長每次洗滌時間為宜,這是防止脫片的較好辦法。洗滌液的PH值應為7.2~7.4之間,過高過低的不利于染色過程,尤其是在偏堿的PH值條件下。

(5)孵育時間與溫度。免疫熒光法一般孵育溫度在37℃,時間為20——30分鐘時是*時間與溫度。當然,也與抗體的效價,組織抗原的含量與部位,切片的厚度等有關。

英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉運蛋白14(GLUT14)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉運蛋白12(GLUT12)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉運蛋白11(GLUT11)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉運蛋白10(GLUT10)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
抗體英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖氧化酶(GOD)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖磷酸變位酶5(PGM5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T


 
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