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培養基研究促細胞分裂劑實驗說明

點擊次數:698 更新時間:2014-08-05
 

培養基研究促細胞分裂劑實驗說明

  通過促細胞培養基分裂劑與細胞表面受體相互作用,在體外觸發細胞的多克隆激活。根據所使用的促細胞分裂劑的不同,應答細胞可以是T淋巴細胞、B淋巴細胞,或兩者同時,或者是單核細胞。細胞激活可以通過細胞增殖、細胞因子分泌、表面抗原表達和/或細胞體積的增加進行檢測。例如在使用B細胞激活劑時,可以通過多克隆免疫球蛋白的分泌進行檢測。

  操作步驟:

  (一)促細胞分裂劑制備

  根據說明書將促細胞培養基分裂劑重新溶解于水或培養液中,制成儲存液(如100´),保存于-20℃。

  (二)促細胞分裂劑滴定

  1.在培養液中稀釋儲存液到所需的*個濃度,通常為理論*濃度的10倍;

  2.在培養基板或試管中直接將促細胞分裂劑進行濃度遞減系列稀釋(100 μl/孔);

  3.每孔平行重復三次;

  (三)細胞激活

  1.分離外周血單核細胞培養基

  2.室溫下用培養液300´g離心10分鐘,收集并洗滌細胞;

  3.計數細胞并將細胞在培養液中重新懸浮至106細胞/ml,在培養板中每孔加入100μl;

  4.在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育(細胞增殖需2-3天;細胞因子測定測定6小時-2天;免疫球蛋白分泌測定需5-10天);

  (四)細胞激活定量測定方法

  1.培養基增殖檢測方法采用MTT測定法;

  2.細胞因子分泌測定或使用市售商業化試劑盒;

  3.免疫球蛋白分泌測定采用ELISA檢測

 
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