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細胞培養基制備中硫酸銨的加入使用

點擊次數:5287 更新時間:2014-07-24
 

細胞培養基制備中硫酸銨的加入使用

    硫酸銨中常含有少量的重金屬離子,對細胞培養基有敏感作用,使用前必須用H2S處理:將硫酸銨配成濃溶液,通入H2S飽和,放置過夜,用濾紙除去重金屬離子,濃縮結晶,100℃烘干后使用。另外,高濃度的硫酸銨溶液一般呈酸性(PH=5.0左右),使用前也需要用氨水或硫酸調節至所需PH。

  硫酸銨的加入有以下幾種方法:1)加入固體鹽法用于要求飽和度較高而不增大溶液體積的情況;2)加入飽和溶液法用于要求飽和度不高而原來溶液體積不大的情況;3)透析平衡法先將鹽析的樣品裝于透析袋中,然后浸入飽和硫酸銨中進行透析,透析袋內硫酸銨飽和度逐漸提高,達到設定濃度后,目的蛋白析出,停止透析。該法優點在于硫酸銨濃度變化有連續性,鹽析效果好,但手續煩瑣,需不斷測量飽和度,故多用于結晶,其它情況少見。

  使用固體硫酸銨時:1)必須注意飽和度表中規定的溫度,一般有0℃或室溫兩種,加入固體鹽后體積的變化已考慮在表中;2)分段鹽析中,應考慮每次分段后細胞培養基濃度的變化。一種蛋白質如經二次透析,一般來說,*次鹽析分離范圍(飽和度范圍)比較寬,第二次分離范圍較窄。3)鹽析后一般放置半小時至一小時,待沉淀*后才過濾或離心。過濾多用于高濃度硫酸銨溶液,因為此種情況下,硫酸銨密度較大,若用離心法需要較高離心速度和長時間的離心操作,耗時耗能。離心多用于低濃度硫酸銨溶液。

 
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